◆原理

M65^® ELISA检测来自死亡细胞释放的可溶性角蛋白18（K18），可以整体评估细胞的死亡情况，判断是由于细胞凋亡还是细胞坏死引起的细胞死亡。M65^® ELISA 最初是为了和M30 Apoptosense^® ELISA配套使用而设计研发的，后者特异性检测细胞凋亡。两者配套使用，可定量检测总的细胞死亡、细胞凋亡和细胞坏死。

由于M30 Apoptosense^® ELISA 和M65^® ELISA 都是用同一标准进行校对的，所以两者配套使用可以评估细胞死亡中细胞凋亡占的比例。

M65^® ELISA可用于检测人血清，并且带有CE认证（可用于体外诊断）

◆M65^® ELISA特点:

● 只特异性定量检测上皮细胞的整体死亡情况

● 与M30 Apoptosense^® ELISA 配套使用，定量检测细胞凋亡、细胞坏死和细胞死亡。

● 夹心法ELISA检测，采用96孔板和即用型试剂，方便使用。

● 试剂盒可多次拆分使用。

● 肝病学：检测肝病患者肝细胞死亡总数。也可用于检测疑似肝病。

● 肿瘤学：检测上皮癌细胞经化疗后的凋亡情况。

● 毒理学：临床评估不同药物对肝细胞的影响。

◆应用

在体内凋亡或者坏死的肿瘤细胞，细胞死亡的模式取决于细胞毒素刺激的类型和肿瘤的类型。在细胞 ATP生成不足的情况下，凋亡刺激可能无法诱导凋亡程序的启动，反而导致细胞坏死 (Leist et al., 1997)。细胞坏死期间，未经caspase水解的细胞内蛋白将会释放到细胞外。

角蛋白18（K18）是在多种细胞内高度表达的胞内蛋白。大多数K18分子在细胞内形成不溶性细丝，但也报道称有部分可溶性K18 (Chou et al., 1993)。细胞死亡时，细胞内K18会释放到细胞外。因此检测细胞外可溶性的K18可反映K18阳性细胞死亡的“过程和原因” (由于细胞凋亡和细胞坏死导致) (Kramer et al., 2004).

K18在细胞凋亡期间被caspase催化发生水解， caspase裂解的片段释放到细胞外。因此细胞外的 caspase-cleaved K18 (ccK18)与总K18的相对比例反映了细胞凋亡与总细胞死亡的相对比例(不同的 “M30:M65比率”) (Kramer et al., 2004).

M65^® ELISA 使用两种IgG型的K18小鼠单抗 ，旨在与 M30 Apoptosense^® 检测一起使用，评估人血清中肿瘤细胞死亡情况。M30 Apoptosense^® ELISA特异性检测caspase-cleavage K18 在Asp396形成的新表位 (K18 Asp396-NE, M30 neo-epitope) ，反映上皮细胞的凋亡情况(Hägg et al. 2002; Bivén et al. 2003)。两种检测试剂盒根据同一标准校对，可以计算caspase-cleaved K18和总K18之间的比率 (“M30:M65 比率”)。培养细胞中诱导细胞凋亡会导致caspase-cleaved K18释放，和较高的 M30:M65比率；而诱导细胞坏死，只会导致释放未被切割的K18分子，和较低的M30:M65比率。因此，通过M30:M65比率就可反映出上皮细胞的死亡模式。

◆产品信息

特异性：人

样品类型：含有从死亡细胞中释放的K18的血清或者血浆（EDTA，citrate，heparin plasma）

灵敏度：11 U/I, Standard A(0 U/L)+2 S.D.

范围：125-2,000 U/L

检测目标物：完整的K18和caspase-cleaved K18

特点：可进行定量检测；预铺ELISA 板（可拆卸）、即用试剂，操作方便；可用于自动化

稀释线性：用M65 Standard A 稀释，平均值是126%（范围116-139%）；用血清稀释，平均值是120%（范围101-133%）

◆产品列表