试剂盒使用问题

1、 在手册中，取血清样本时，需要使用无抗凝血剂的试管。如果用抗凝血剂或分离凝胶的试管快速获得血清，会影响测试结果吗？

　　试管应不含抗凝血剂的理由是因为，这是获得血清的标准方法。如果使用抗凝血剂，能得到血浆。

　　此问题的讨论研究请点击

　　https://www.researchgate.net/post/Separating_serum_from_plasma

2、是否有关于使用空白管的温度和血清的制备时间的建议？

　　当涉及到温度、准备时间和其他有关制备血清的外部因素时，建议按照标准方法做。

　　操作指示是只涉及我们的试剂盒和产品，制备血清样品最好取决于所使用的产品。

　　包装内有2张封板膜。

4、M30和M65的标准液A、冲洗液（wash tablet）和终止液是否通用？

　　一般来说ELISA的反应终止液是让酶失活，原理上来说，应该是可以通用的，但是我们不能提供终止液的具体配方，无法确定加入后是否对pH有影响，所以还是建议不要混用。
　　另外就是标准液A，虽然都是0 浓度，但是两个标准液PBS和胎牛血清的比例是不同的，为了保证标曲的准确性，也是分开使用的好。

5、如果没有微量震荡器（microplate shaker），有其他解决方法吗？

　　震荡是为了让抗体更好的结合，请参照说明书给出的参数震荡孵育。

6、孵育4h 要不要避光

　　一般试验孵育放在袋子里面，说明书中抗体需避光保存，孵育时请也尽量避光。

7、结果计算方法

　　说明书要三次样条插值（cubic spline）。

8、样品浓度较高需要稀释至“标准A”的4-8倍，但试剂盒中标准A只有2mL，不足以稀释，是否能单卖标准A？
　　不能单人单卖标准A。建议稀释至1:5甚至1:10实验。

9、手册中提及可通过使用人血清（不使用标准A）准备稀释液。能否提供此稀释溶液准备的操作步骤？

　　请参阅市售的人血清或血浆样品。

10、手册提及“避光保护”，准备抗体孵化时是否需要避光保护？
　　不建议把板置于阳光直射之下，这就是为什么液体为蓝色。建议用铝箔覆盖板和液体。

注意事项

1、M65两款试剂盒的区别

　　M65 Epideath^® ELISA 和M65^® ELISA 检测含有循环角蛋白K18的病人样品时，能产生相似的信号。两种检测的主要区别在于大部分样品M65^® ELISA在200-300U/L显示值而M65 EpiDeath ^® ELISA在＜100 U/L中显示值。

2、检测M30：M65比例的注意事项

　　需要注意“M30：M65的比率”只有在样品中K18水平升高才具有意义。（即M65 EpiDeath^® ELISA中＞300 U/L）
　　( Linder et al., Expert Reviews in Molecular Diagnostics 10, 353, 2010)